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PCR實驗室核酸污染清除方案 |
PCR實驗室核酸污染清除方案 PCR 技術是一種體外模擬DNA復制過程的核酸擴增技術,主要通過重復高溫變性、低溫退火和延伸三個循環,然后將靶DNA擴增數百萬倍,因此PCR技術的優勢就是極高的靈敏度,但正由于高度敏感性,核酸污染極易產生,核酸污染物具有積累性和持續性,且難以去除,為了有效避免污染,我們需要一定的措施來預防和消除污染。 常見的污染的來源 (1)試劑污染 由于在PCR試劑配制過程中,由于加樣器、容器、水及其他溶液被核酸污染。 (2)設備污染 半自動核酸提取儀、全自動核酸提取儀在提取過程導致濺灑樣本或者核酸模板,污染機器?;蛘咴O備內垃圾筒清潔不徹底,殘留液體或結晶揮發形成氣溶膠對造成污染。 (3)標本交叉污染 可能是由于收集標本的容器被污染,標本放置時由于密封不嚴溢于容器外,容器外黏有標本,吸樣器污染及空氣中的氣溶膠導致的標本間交叉污染。尤其是病毒類可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散,導致彼此間的污染。 (4)PCR擴增產物污染 這是PCR中最常見的污染問題,常見于需要在擴增后開蓋的檢測項目,或者是擴增后產物處理不當,因為PCR產物拷貝量大,遠遠高于PCR檢測數個拷貝的極限,所以極微量的PCR產物污染就可形成假陽性。 (5)克隆質粒的污染 在實驗室操作中經常會用到陽性參考品,這些陽性參考品大多數是由某些用克隆質粒制作而成,克隆質粒在單位容積內濃度高,不小心使用極易造成污染。 有些實驗室自己克隆質粒做質控品,配制過程后,垃圾的處理方式不嚴格等,從而造成質控品對實驗室的污染進而造成實驗室對標本的污染。 控制污染的措施 (1)實驗分區域 合理分隔實驗室。將樣品的處理、配制PCR反應液、PCR循環擴增及PCR產物的鑒定等步驟分區或分室進行,特別注意標本處理及PCR產物的鑒定應與其他步驟嚴格分開。 最好能劃分:標本處理區,PCR反應液制備區,PCR循環擴增區,PCR產物鑒定區。其實驗用品及吸樣槍應專用。 實驗前應將實驗室用紫外線消毒以破壞殘留的 DNA 或RNA. (2) 各區物品不得混用 各個實驗區域要對不同設備、物品顏色有明顯的標記,如各區域使用專門的工作服、工作鞋、垃圾桶、拖把、抹布、筆等,避免不同工作區域內的設備、物品混用。 使用一次性用具吸頭、離心管、無粉塵手套、口罩等 (3)設置規范的空調通風系統 盡可能采用全送全排空調系統。在進入各個操作區域需要嚴格單一流向進行,即試劑準備和貯存區→樣品制備區→PCR擴增區→擴增產物分析區,不得逆行。 (4)污染監測 設立陽性對照、陰性對照,進行重復試驗,選擇不相同區域的引物進行PCR擴增等,做好污染監測,以便采取措施防止和消除污染。 (5)定期實驗室清潔 1) 日常清潔:實驗前后用PCR Cleaner重點清潔實驗臺面、超凈工作臺及儀器表面等容易產生核酸污染的區域(可用盒裝)。 2) 周/月清潔:清潔范圍可擴大至:實驗室墻面、試劑架、地面、玻璃、門把手及實驗服等接觸較多的區域(可用桶裝)。 上述就是為你介紹的有關PCR實驗室核酸污染清除方案的內容,對此你還有什么不了解的,歡迎前來咨詢我們網站,我們會有專業的人士為你講解。 |
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